Convertirse en Schizophyllum Commune: crear un cultivo estéril a partir de hongos encontrados: 3 pasos (con imágenes)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Última modificación: 2024-01-30 08:44

Este instructivo se centra en explicar cómo crear un cultivo estéril del hongo Schizophyllum Commune (nombre común del hongo Split Gill) en una placa de Petri utilizando los hongos encontrados. Se ha encontrado que Schizophyllum Commune tiene más de 28.000 sexos, se puede encontrar en todos los continentes excepto en la Antártida, y tiene la capacidad (como otros "hongos de pudrición blanca y marrón") de degradar la contaminación disruptiva endocrina (plásticos, hormonas que imitan petroquímicos industriales como el fertilizante Atrazina, el plastificante Bisfenol-A o la hormona sintética Dietilestilbestrol).

Repasaré las técnicas de identificación de hongos silvestres, cómo hacer una placa de Petri de agar nutritivo y cómo usar los hongos encontrados para cultivar un cultivo aislado estéril en su placa de Petri. Otros instructables de esta serie repasan técnicas como la identificación genética de hongos, ensayos enzimáticos simples para probar la capacidad del hongo para descomponer los plásticos y la contaminación que imita las hormonas, y cómo hacer queso con S. Commune.

Este proyecto surgió del trabajo colaborativo de Mary Maggic, Paula Pin y yo durante una residencia en HANGAR en Barcelona España en septiembre de 2018. Para obtener más información sobre el proyecto, sigue leyendo ~~ o sáltate todos los Bla Bla y ve directamente al Paso 1 para el tutorial:)

Las imágenes son de Schizophyllum Commune Fanzine ~ los archivos se pueden descargar gratis aquí

Durante la residencia nuestros tres objetivos principales fueron:

1 ~ Investigar y digerir la literatura científica sobre Schizophyllum Commune y sus diversas interacciones con hormonas y contaminantes petroquímicos disruptores endocrinos. S. Commune es uno de los muchos hongos de "podredumbre blanca y marrón" con la capacidad de descomponer la contaminación hormonal y endocrina. Estos hongos se alimentan de los árboles excretando enzimas "lignocelulósicas" de sus cuerpos en red o "micelios" y las enzimas pueden descomponer la celulosa y la lignina de las que están hechos los árboles. Debido a las similitudes estructurales entre la celulosa, la lignina y las hormonas EDS / como la atrazina, el BPA, el estradiol, el dietilestilbestrol y los nonilfenoles, las enzimas "lignocelulósicas" secretadas por los hongos también pueden degradar una amplia variedad de sustancias tóxicas. Además de esto, S. Commune produce polisacáridos inmunoestimulantes que son útiles como tratamientos y prevención del cáncer (aprobados en Japón para el tratamiento de cánceres de cuello uterino), pueden mejorar las propiedades fitoestrogénicas de ciertas plantas a través de la fermentación, pueden usarse en lugar de cuajo y lactobacilius en procesos de fabricación de queso y producen enzimas de disolución de coágulos de trombina (útiles en el tratamiento de la trombosis). Curiosamente, estos mismos "beta-glucanos" que se pueden extraer con agua hirviendo como tratamientos contra el cáncer e inmunoestimulantes, también son utilizados por la industria del petróleo para mejorar los rendimientos de aceite, uniendo a S. Commune en un circuito de retroalimentación bizaar a la producción de disruptores endocrinos. petroquímicos que es capaz de degradar y remediar.

2 ~ Desarrollar protocolos DIY y DIWO (hágalo con otros) que simplifiquen estas recetas para trabajar con EDC y hongos para traducir el conocimiento científico codificado a un lenguaje que sea más accesible. Utilice estas recetas para la educación, el cuestionamiento, la resistencia a las colonizaciones moleculares y la creación de nuevas narrativas sobre los devenires de múltiples especies y nuestra mutagénesis colectiva.

3 ~ Desafíe el discurso dominante cisheteronormativo y queerfóbico que rodea a las sustancias químicas disruptoras endocrinas (EDC). Para citar la erudición de Malin Ah-King y Eva Hayward sobre estos temas, "Muchos medios noticiosos están informando sobre estos espantosos relatos endocrinos desde nuestros patios traseros. En un esfuerzo por poner en primer plano estos problemas, como describiremos a continuación, los medios de comunicación han revelado una metamorfosis de Frankenstein. que amenaza el sexo y la sexualidad. En lugar de abordar los muchos otros riesgos para la salud asociados con la exposición a sustancias tóxicas, los temas más sensacionalistas y polémicos representan el debate y la respuesta crítica. Se plantean preguntas: ¿Por qué el sexo es más importante que el cáncer, las enfermedades autoinmunes, ¿e incluso la muerte? ¿Qué nervios culturales (muchos de los cuales están globalizados) se desencadenan? Y, para aquellas de nosotras con preocupaciones feministas, ¿cómo reorientar el debate lejos del esencialismo, el sexismo y la heteronormatividad? " (Sexos tóxicos).

Schizophyllum Commune es un "hongo de pudrición blanca" único en el sentido de que se ha encontrado que tiene más de 28.000 sexos genéticos. Esta adaptación, muchos teorizan, ha permitido la increíble diversidad genética de esta especie que existe en todos los continentes del mundo excepto en la Antártida. Queríamos celebrar la hermosa multiplicidad sexual de este organismo como un ejemplo de la rareza de la biología. El discurso dominante que rodea a los EDC en los medios, e incluso de los activistas ambientales, se centra en gran medida en narrativas no científicas, de que estas moléculas causan ciertas sexualidades o géneros que nuestra sociedad patologiza, etiqueta como no normativas y, a menudo, busca eliminar o evitar. No solo es el foco de pánico sexual y fobia al sexo de la protesta pública sobre la falta de realismo científico de la EDC (las hormonas y los disruptores endocrinos no hacen que las personas sean queer o trans), sino que está ignorando todos los efectos devastadores que podemos relacionar con los EDC: la obesidad, trastornos de la tiroides, ciertos cánceres, entre otros riesgos para la salud.

Paso 1: Encuentre Schizophyllum Commune viviendo en su comunidad

Los cultivos estériles de laboratorio de Schizophyllum Commune se pueden comprar por alrededor de $ 350 en un banco de cultivos microbiológicos como ATCC … razón por la cual optamos por cultivar hongos silvestres de forma gratuita:)

Lo tuve fácil porque había estado leyendo sobre Schizophyllum Commune y un día me di cuenta de que crecía en un árbol frente a mi apartamento. Si no tiene tanta suerte de toparse accidentalmente con S. Commune en su vecindario, querrá ir a un área boscosa para buscar hongos "de soporte" que crecen en árboles de madera enfermiza (árboles que parecen no estar creciendo demasiado bien) o árboles caídos. S. Commune es uno de los hongos existentes más comunes en todo el mundo y se puede encontrar básicamente en cualquier lugar donde haya madera dura para crecer.

Mushroomobserver.org proporciona una excelente descripción detallada de dónde y cuándo es probable que encuentre S. Commune, así como también cómo identificarlo y cómo evitar "semejanzas" que podrían llevar a una identificación errónea:

IDENTIFICACIÓN: Schizophyllum commune se identifica fácilmente por sus branquias divididas, pelo denso y gorro en forma de abanico. El gorro mide entre 1 y 4,5 cm de ancho y suele tener forma de concha o abanico con una superficie de gris a blanquecina. Las basidiosporas miden entre 5 y 7,5 x 2 -3 micrómetros Un hongo similar conocido como Plicaturopsis crispa “Crimped Gill” no tiene una distribución tan amplia.

HABITAT: Schizophyllum commune crece en madera dura utilizando enzimas para degradar la lignina y causa la "pudrición blanca". Por lo tanto, se encuentra en la mayoría de las áreas boscosas. Se puede encontrar durante todo el año debido a su capacidad para secarse, rehidratarse en mejores condiciones y luego continuar esporulando.

Este hongo puede ser parásito en árboles de pequeño diámetro que están sometidos a estrés por otros factores, como la sequía.

ASPECTO IGUAL: Plicaturopsis crispa o el "Crimped Gill" es similar al Split Gill. También tiene un cuerpo fructífero en forma de concha / abanico. Sin embargo, la tapa es de color marrón rojizo o marrón amarillento, y la parte inferior es muy distintiva. Tiene branquias en forma de venas rizadas que son muy diferentes a las branquias divididas de Schizophyllum commune. La branquia ondulada es menos común pero distintiva cuando se encuentra ".

Paso 2: Haga placas de agar nutritivo para que S. Commune crezca

Para aislar un cultivo de S. Commune, se encuentra que necesitará algunas placas de Petri llenas de alimento para el hongo. El agar extracto de malta es un alimento fácil de preparar para S. Commune, o "medio nutritivo" que se puede preparar con ingredientes de fácil acceso. También es una buena fuente de alimento para usar cuando se realizan experimentos de ensayos enzimáticos con S. Commune y otros hongos de pudrición blanca o marrón ~~ este proceso se tratará en otro instructivo.

NOTA ADICIONAL: Si tuvo problemas para encontrar S. Commune, hay muchos otros hongos en la misma familia que se pueden cultivar usando los mismos procesos y son tan buenos, si no mejores, para degradar contaminantes que alteran el sistema endocrino. La cola de pavo (Trametes Versicolor) se ha encontrado en muchos estudios que observaron que cientos de hongos de pudrición blanca y marrón son los mayores productores de enzimas "lignocelulósicas" que degradan la contaminación petroquímica. Los hongos ostra también son muy buenos en esto.

Hago mi trabajo microbiológico en un laboratorio de biología comunitario llamado BUGSS (Espacio Científico Subterráneo de Baltimore) donde tengo acceso a cristalería, balanzas digitales, cilindros graduados, un autoclave (para esterilización por calor y presión de los medios), etc. surgió en todo el mundo en la última década, por lo que es posible que desee consultar esta lista para ver si hay uno cerca de usted. Si no tiene un gran laboratorio comunitario como este en su área, tendrá que invertir en algunos equipos básicos para este proceso, como:

1 ~ Una balanza digital para medir sus ingredientes con precisión

2 ~ Una olla a presión para esterilizar sus medios con calor y vapor.

3 ~ Placas de Petri, se pueden comprar en línea a un precio bastante bajo, el vidrio reutilizable o el plástico desechable funcionarán, pero la reutilización siempre es mejor:)

4 ~ Algunos artículos de vidrio para mezclar los ingredientes, esterilizarlos y almacenarlos.

Si no desea invertir en ese equipo, puede encontrar placas de agar con extracto de malta previamente vertidas para comprar en sitios web como Amazon ~ simplemente será más costoso a largo plazo si planea continuar con el trabajo microbiológico.

Ya hay muchas guías excelentes y videos de YouTube sobre cómo hacer sus propias placas de Petri con medios de nutrientes en casa. Entonces, en lugar de entrar en grandes detalles sobre esto, solo lo vincularé a un par y proporcionaré la receta para el agar con extracto de malta al 2%, que es el medio nutritivo que usará.

Freshcap Musrooms: Guía sobre cómo hacer placas de agar para cultivar hongos en casa

Mykoweb: Introducción al cultivo de hongos

Hoja de datos técnicos del agar extracto de malta

Agar de extracto de malta al 2% (MEA) ~~ Receta para 1 litro:

20 g de extracto de malta (suministro común para la elaboración de cerveza, se puede comprar en línea)

15 g de agar (agente solidificante: se usa para cocinar con frecuencia, por lo que se puede comprar en línea o en algunas tiendas de comestibles)

1 litro de H2O (normalmente uso agua de ósmosis inversa que se puede comprar en la mayoría de las tiendas de comestibles en jarras de un galón)

Esta receta se puede modificar fácilmente si desea hacer cantidades más pequeñas. A menudo hago solo 250 ml a la vez, por ejemplo, por lo que solo termino usando 5 gramos de extracto de malta, 3.75 gramos de agar y 250 ml de agua.

Paso 3: ¡Inocule su placa de Petri con hongos

El hongo que ves se llama "cuerpo fructífero"; es solo una pequeña parte del organismo. La mayor parte de su cuerpo está escondido en el árbol (o en el suelo), consumiendo la madera. Esta parte del hongo se llama micelio. Para cultivar el cuerpo micelial, tentacular, rizomático, filamentoso blanco de Schizophyllum Commune en una placa de Petri, tomará una muestra del tallo, esterilizará y colocará en las placas MEA. El micelio crecerá a partir de la muestra esterilizada del núcleo del tallo del hongo y colonizará la placa de Petri, luciendo como una estera algodonosa blanca.

Necesitarás:

• Las placas de agar extracto de malta (MEA) que preparó en el paso anterior
• Alcohol isopropílico al 70% (alcohol isopropílico) y una botella con atomizador
• Toallas de papel
• Bisturí, o simplemente una navaja de acero inoxidable: el cortador de cajas funcionará
• pinzas de metal
• guantes
• Una llama: uso una lámpara de alcohaul para esterilizar instrumentos, NonDisjunction tiene un gran tutorial sobre cómo hacer una aquí.
• Superficie estéril para cortar (solo usé una placa de Petri estéril para esto)
• Parafilm, una película de parafina que se usa para sellar placas de Petri; también puede usar cinta adhesiva si no tiene esta

TÉCNICA ESTÉRIL:

Lo principal que debe tener en cuenta al intentar utilizar una técnica estéril es que las bacterias y las esporas caen continuamente en el aire, por lo que debe mantener sus placas de Petri cubiertas tanto como sea posible. Cuando levante las tapas para verter el medio o inocular, siempre es mejor sostener la tapa justo encima del plato, lo que le permite acceder al interior de forma horizontal, pero manteniendo la tapa sobre el plato para evitar que caigan bacterias. En segundo lugar, usted son un conglomerado gigante de organismos humanos, bacterianos, fúngicos y otros ~~ aunque no puede verlo, está rodeado por una densa nube de microbios que se difunden fuera de su cuerpo. En lugar de simplemente sentarse en la superficie de tu piel, tu microbioma se extiende en el aire ~~ muuuuuuuuuuuuuuuuuuuu, nunca muevas tus manos sobre la placa de Petri, ni te inclines sobre la placa abierta para mirar. Y usa guantes si tu los tienes;)

CONFIGURA TU ESPACIO DE TRABAJO SEMIESTERIL

Elija una superficie de trabajo no porosa libre de escombros y basura. Rocíe el área con su solución de alcohol isopropílico al 70% y límpiela con una toalla de papel. Coloque su llama en el centro de su área de trabajo y enciéndala. Querrá trabajar lo más cerca posible de la llama porque crea un pequeño campo estéril a su alrededor. Coloque sus placas MEA a un lado y su muestra de hongo sobre una superficie de corte estéril en el otro lado. Normalmente uso una placa de Petri estéril como superficie de corte estéril y como soporte para herramientas. Vierta un poco de alcohol isopropílico en un vaso pequeño; lo usará para esterilizar la cuchilla y las pinzas mientras trabaja.

* ¡~ INOCULAR ~! *

Antes de hacer cualquier cosa, esterilice la hoja y las pinzas sumergiéndolas en el alcohol isopropílico y luego manteniéndolas sobre la llama por un momento. Después de la esterilización, colóquelos sobre su superficie de corte estéril si los deja. Con las pinzas, mantenga quieto el tallo del hongo y corte un trozo del extremo. Tome este trozo y corte todos los lados para que termine con un pequeño cubo de núcleo de tallo de hongo sin todas las superficies externas. Esto ayuda a deshacerse de todos los demás microbios que viven en el hongo para que no contaminen su cultivo. Luego sumerja el núcleo del tallo en el isopropilo durante unos 30 segundos, sáquelo y déjelo secar dentro del campo estéril de la llama (no use la llama para secarlo, esto matará el hongo). Vuelva a esterilizar las pinzas a la llama mientras espera a que se seque el núcleo del tallo. Luego, simplemente levante la tapa de una de sus placas MEA lo suficiente para deslizar las pinzas desde un lado y use las pinzas esterilizadas para colocar el núcleo del vástago en el centro de la placa. Selle la placa con parafilm, y durante las próximas semanas, debería ver el micelio S. Commune colonizando la placa.

Por lo general, hago varias placas cuando trabajo con muestras silvestres, de modo que si me contaminan, es más probable que tenga al menos un cultivo limpio.